图1 标样色谱图
1-甲醇；2-异丙醇；3-乙酸乙酯；4-环己烷；5-甲苯。
Fig. 1 The chromatogram of standard sample
1-methanol；2-isopropanol；3-ethyl acetate；4-cyclohexane；5-toluene.
陈盼盼1，刘璇1，王丹华2，王宏亮1(1.临海市食品药品检验检测中心，浙江 台州 317000；2.台州职业技术学院，浙江 台州 318000)
摘要：目的 建立顶空气相色谱法测定氯沙坦钾原料药有机残留溶剂的方法。方法选用Agilent 7890气相色谱仪，配备7697顶空进样器，DB-624毛细管色谱柱作为分析柱，FID检测器，外标法测定；并对分析方法建立进行研究。结果甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷、甲苯分别在0.122～90.2，0.28～151.3，0.03～61.4，0.22～76.4，0.035～26.8 μg·mL-1线性关系良好(r＞0.999)；各组分检测限分别为0.037，0.090，0.009，0.070，0.012 μg·mL-1；各组分平均回收率为90.0%～110.0%。结论该方法简单、可靠、准确，可用于原料药氯沙坦钾有机残留溶剂的测定。
关键字：气相色谱法；顶空；原料药；氯沙坦钾；残留溶剂
氯沙坦钾(losartan potassium，ARBs)由美国默克公司开发，为常用的抗高血压药之一，是第一个非肽类血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂，可选择性地拮抗AT1受体，对其他受体系统基本无影响[1-3]。ARBs与血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI)相比，ARBs对肾素-血管紧张素系统(rein-angiotensin system，RAS)的抑制作用更全面，与ACEI合用可使疗效协同增强。同时ARBs可阻滞产生于全身循环或局部组织的AngⅡ的有害作用[4-9]。ARBs是一种作用持续稳定、耐受性良好、安全的治疗轻、中度原发性高血压的药物。其在合成中引入了甲醇、环己烷、甲苯、异丙醇等溶剂。残留溶剂，又称有机挥发性杂质，既无防治作用，又可能对人体的健康造成一定的危害。根据ICH指导原则要求，应对ARBs生产或纯化中使用的溶剂进行检测。但ARBs中有机溶剂残留量的测定尚未见文献报道。本实验首次建立毛细管气相色谱法配以顶空进样，对ARBs原料药中有机溶剂残留量分析进行了系统性的研究与确认，为ARBs的质量控制提供参考数据。
Agilent 7890气相色谱仪，Agilent 7697顶空进样器，Agilent DB-624毛细管色谱柱(30 m× 0.53 mm，3 μm)(Agilent公司)；XS205DH电子天平(梅特勒-托利多公司)。
甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷、甲苯(国药集团化学试剂有限公司，批号分别为20161127，20150608，20141216，20150819，20160521，含量均为99.9%)；DMSO(分析纯，美国默克公司，批号：20160548)；纯化水(密理博制水器自制)。
2.1 色谱条件
进样口温度：150 ℃；检测器温度：250 ℃；柱温：50 ℃；分流比：1∶1；载气：氮气；载气压：45 kPa；顶空瓶温度：85 ℃；LOOP管温度：105 ℃；TR LINE温度：105 ℃；顶空瓶保温时间：40 min；循环时间：30 min；加压时间：0.50 min；进样体积：1 mL。
2.2 溶液配制
2.2.1 空白溶液 移取5.0 mL纯化水于20 mL顶空瓶中，密封得空白溶液。
2.2.2 对照品储备溶液 准确称取60 mg甲醇、100 mg乙酸乙酯、40 mg环己烷、50 mg异丙醇、17.8 mg甲苯，置于100 mL量瓶中，先加入5 mL DMSO使溶解，再用纯化水稀释至刻度，摇匀，备用(甲醇：600 μg·mL-1，乙酸乙酯：1 000 μg·mL-1，环己烷：400 μg·mL-1，异丙醇500 μg·mL-1，甲苯：178 μg·mL-1)。
2.2.3 对照品溶液 准确量取10.0 mL对照品储备溶液，置于100 mL量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，备用(甲醇：60 μg·mL-1，乙酸乙酯：100 μg·mL-1，环己烷：40 μg·mL-1，异丙醇50 μg·mL-1，甲苯：17.8 μg·mL-1)。
2.2.4 供试品溶液 精密称取0.1 g供试品，置于20 mL顶空瓶中，加5 mL纯化水使溶解，密封，振摇即得供试品溶液。
2.3 系统适用性试验考察
按“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件分别进样分析，色谱图见图1。结果色谱图中各被测物色谱峰相互间的分离度均符合要求，其分离度分别为9.85，11.85，2.76，24.40。
图1 标样色谱图
1-甲醇；2-异丙醇；3-乙酸乙酯；4-环己烷；5-甲苯。
Fig. 1 The chromatogram of standard sample
1-methanol；2-isopropanol；3-ethyl acetate；4-cyclohexane；5-toluene.
2.4 线性关系考察
精密量取“2.2.2”项下对照品储备溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，15.0 mL，分别置于100 mL量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，即制成相当于对照品溶液的20%，60%，80%，100%，120%，150% 的线性系列测试溶液，另以各被测物的定量限浓度溶液作为各溶剂线性测试的最低点，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。以线性测试溶液的浓度为横坐标，被测物峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程见表1。
表1 线性回归方程及相关系数
Tab. 1 Linear regression equation and correlation coefficient
2.5 仪器精密度考察
精密量取“2.2.3”项下混合对照品溶液5份，各5.0 mL，置顶空瓶中，作为精密度试验用测试溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。以各被测溶剂峰峰面积对仪器精密度进行考察。测得甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷、乙酸乙酯的RSD分别为1.9%，2.3%，3.1%，3.3%，1.0%。
2.6 重复性试验
按“2.2.3”项下方法配制对照品溶液5份，按“2.1”色谱条件设置顶空和气相色谱仪参数，待仪器稳定后，分别进样1次，测定峰面积，结果测得甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷和甲苯的RSD分别为2.1%，3.2%，1.8%，3.3%和1.4%。
2.7 稳定性考察
精密称取0.1 g供试品，加入“2.2.3”项下对照品溶液5 mL使溶解，密封，摇匀，同法配制6份。分别于0，2，4，6，8，10 h取上述6份溶液按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱峰面积。结果甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷和甲苯的RSD分别为2.1%，2.2%，1.2%，3.6%和1.9%。
2.8 回收率考察
以“2.4”项下的80%，100%，120%线性测试溶液分别作为回收率测试的低、中、高3个浓度的对照品溶液。精密称取已知溶剂含量的ARBs供试品9份，其中3份精密加入80%对照品溶液5 mL，3份精密加入100%对照品溶液5 mL，另3份精密加入120%对照品溶液5 mL，振摇使样品完全溶解，摇匀，按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。计算各溶剂的回收率，结果甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷和甲苯的平均回收率分别为96.7%，94.7%，97.9%，96.7%和97.5%，RSD分别为2.1%，3.8%，1.9%，3.5%和1.2%。
2.9 检测限和定量限考察
取对照品溶液，逐级稀释，分别进样，以信噪比为3左右计算检测限，以信噪比为10左右计算定量限。结果甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷和甲苯的检测限分别为0.037，0.090，0.009，0.070，0.012 μg·mL-1，相当于样品的检测限分别为1.8×10-6，4.5×10-6，0.45×10-6，3.5×10-6，0.60×10-6μg·g-1；甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷和甲苯定量限分别为0.12，0.28，0.03，0.22，0.035 μg·mL-1，相当于样品定量限分别为6.1×10-6，14×10-6，1.5×10-6，11×10-6，1.7×10-6μg·g-1。
2.10 样品测定
分别精密称取3批样品各0.1 g，按“2.2.4”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件进行检测，结果见表2。
表2 样品检测结果
Tab. 2 The test results of samples μg·g-1
3.1 溶剂选择
ARBs是一种含有碱金属的药物，经查询化合物溶解性表，钾盐均溶于水，并且在选定的色谱条件下，各溶剂残留均能达到良好的分离且不干扰样品的测定，故选用纯化水为溶剂。
3.2 顶空条件的选择
3.2.1 顶空保温温度的选择 顶空装置中的保温温度与饱和蒸气压有关。温度越高，饱和蒸气压越高，顶空气体的浓度越高，检测灵敏度就越高。因此可以通过提高温度来提高灵敏度。本实验使用的溶剂为水，沸点为100 ℃，继续升高温度，会导致水蒸气膨胀，压力升高，引起顶空瓶的爆裂和仪器气密性等问题，影响测定，故本实验选择85 ℃作为保温温度。
3.2.2 顶空保温时间的选择 保温时间取决于被测组分分子从样品溶液到蒸气的扩散速度。保温温度不同，保温所需的时间也不同。本实验以保温温度为85 ℃，对各溶剂在平衡时间为5，10，20，30，40，60 min时的色谱峰面积进行了实验。实验证明当保温时间＞40 min时，其色谱峰面积基本不再增加，证明在40 min时，各待测组分气液两相已经平衡，且无杂质峰干扰，故本实验选择40 min作为顶空保温时间。
本实验建立气相色谱仪配备顶空进样器，测定ARBs原料药中的有机残留溶剂甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷、甲苯。并对方法的系统适用性、精密度、线性关系、检出限与定量限、回收率等进行了考察，根据中国药典2015年版四部通则0861要求，甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷、甲苯限量分别不得过0.3%，0.5%，0.5%，0.388%，0.089%[10]。上述结果表明，这3批ARBs中的5种溶剂残留符合我国药典中的相关限度标准，证明本方法能够满足药典中相应残留溶剂的限量标准要求，可以为ARBs残留溶剂的药典标准制定提供依据，并为ARBs产品残留溶剂检测项目提供技术参考。
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Determination of Residual Solvents in Losartan Potassium by Head Space Gas Chromatography
CHEN Panpan1, LIU Xuan1, WANG Danhua2, WANG Hongliang1
(1.The Inspection Testing Center of Food and Drug in Linhai, Taizhou 317000, China; 2.Taizhou Vocational & Technical College, Taizhou 318000, China)
ABSTRACT：OBJECTIVE To establish a head space gas chromatography method for determination of residual solvents in active pharmaceutical ingredients of losartan potassium.METHODSAgilent 7890 gas chromatography with 7697 head space sampling and FID detector was selected. And DB-624 capillary column was used as analytical column. External standard method was used to determine the content. The analytical method was also explored.RESULTSA good linear correlation of methanol, isopropanol, ethyl acetate, cyclohexane and toluene were showed at the range of 0.122-90.2, 0.28-151.3, 0.03-61.4, 0.22-76.4 and 0.035-26.8 μg·mL-1with r＞0.999, respectively. Detection limit of each components was 0.037, 0.090, 0.009, 0.070, 0.012 μg·mL-1, respectively; Recovery range was 90.0%-110.0%.CONCLUSIONThe method is simple, reliable and accurate, can be used for determination of preservatives and sweeteners in oral liquid preparation.
KEY WORDS：gas chromatography; head space; active pharmaceutical ingredients; losartan potassium; residual solvents
中图分类号：R917
文献标识码：B
文章编号：1007-7693(2017)07-1015-03
DOI：10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2017.07.018
引用本文：陈盼盼, 刘璇, 王丹华, 等. 顶空气相色谱法检测原料药氯沙坦钾中的残留溶剂[J]. 中国现代应用药学, 2017, 34(7)：1015-1017.
收稿日期：2017-01-06
(本文责编：李艳芳)
作者简介：陈盼盼，女，硕士生，工程师 Tel： (0576)85179986 E-mail： 442044271@qq.com